ПАВ
Результаты исследований показали, что ПАВ заметно снижали индекс инфицирования ткани, при этом дозы, лимитирующим фактором для использования которых являлась лишь цитотоксичность, в ряде случаев заметно превышали минимальные концентрации, ингибирующие рост стрептококка. Следовало ожидать дополнительного обеззараживающего эффекта за счет гибели бактерий, прилипших к эпителию. Это подтверждалось изменением окраски и морфологии возбудителей (появление раздутых форм вследствие нарушения проницаемости клеточной стенки микроба). Таким образом, выявлена принципиальная возможность использования проти-воинфекционных агентов, значение которых связано не только с бактерицидным действием, но и со способностью изменять состояние лиган-дов и рецепторов эпителия в суббак-териостатических концентрациях. Дозы, которые следует использовать в клинике, должны быть ниже токсической (MTKso) не менее чем в 2 раза. Если используемые при этом дозы равны или больше МИК, то следует ожидать двустороннего действия на ткань и возбудителя, что может повысить терапевтическую ценность препарата. Представленная система оценки противоинфекцион-ных свойств ПАВ оказалась очень удобной и позволяющей осуществлять скрининг препаратов, оценивать их токсичность для ткани, подлежащей деконтаминации, и эффективность ингибирования адгезии.
В эксперименте выявлено, что различные клетки неодинаково чувствительны к адгезии исследованных возбудителей (псевдомонас, стафилококк, грибы рода Candida), выделенных из клинического материала. Так, псевдомонады способны инфицировать почечную ткань человека и обезьяны, клетки Нер-2 и эпителий влагалища, и только почечный эпителий собаки менее чувствителен к инфекции этим возбудителем. Различные штаммы стафилококка проявляют неодинаковую способность инфицировать различные ткани: штаммы 8325 и 209 более активно инфицировали клетки эпителия влагалища, штамм 1582 — эпителий почки человека. Оказалось, что грибы рода Candida наиболее активны на клетках эпителия влагалища. В связи с тем, что клетки эпителия влагалища оказались наиболее чувствительной системой для тестирования адгезивных свойств всех трех возбудителей, она и была выбрана для дальнейших экспериментов для того, чтобы подтвердить возможности использования предлагаемого способа в системе нормальных клеток человека, инфицированных различными видами микроорганизмов. Выявлено, что противоинфекционная активность ПАВ зависит от возбудителя.
Эффективные противоинфекци-онные дозы ПАВ для стафилококка составляют 1—25 мкг/мл, а для псевдомонад— около 25 мкг/мл.
Примером получения достаточно детальной характеристики, включающей в себя бактериостатическую, антиадгезивную и токсикологическую оценки, явилось исследование антисептика полисепта из класса полимерных бигуанидиновых оснований. Анализ позволил выявить такие положительные качества препарата:
1) наличие собственной антиадгезивной активности в отношении грамположительных и грамотрица-тельных микроорганизмов;
2) не только отсутствие инактивации антисептика в присутствии 50% сыворотки крови, но и некоторое усиление антиинфекционных характеристик;
3) значительное отличие МИК (0,63—1,25 мкг/мл) в содержащей сыворотку крови среде, имитирующей условия макроорганизма.
Токсикологическая оценка препаратов по биохимическим показателям нормального метаболизма клеток (индуцированному ПОЛ, изменению активностей ферментов ЛДГ и ДТ-диа-форазы) может служить точным инструментом для выявления границ лекарственной безопасности, особенно при тестировании вновь созданных антиинфекционных агентов.
Выявление антиадгезивной активности соединений с различными механизмами действия в лиганд-рецептор-ном комплексе показало, что эффективные протекторы могут находиться в разных классах препаратов. Так, на примерах полисепта, хлоргексидина и полимерного катапола продемонстрирована способность антисептиков снижать обсемененность клеток-мишеней. К числу биологически активных анти-адгезантов можно отнести нативную сыворотку, ее отдельные компоненты (альбумин, глобулины нормальный и стафилококковый), а также лактофер-рин и муцин слюны, тем более что высокое содержание в них сиаловых кислот теоретически предсказывало наличие у них антиадгезивного эффекта. Конкурентное связывание клеткой-мишенью микроорганизмов разных таксономических единиц, включая сапрофитные формы (на примере Corynebac-terium xerosis) [Афиногенов Г.Е. и др., 1996], оказалось самостоятельным направлением в разработке систем профилактики инфекционного процесса эу-биотиками. Впервые убедительно продемонстрирована антиадгезивная в отношении участников комплекса «патоген — клетка хозяина» протективная активность липосом, что делает перспективным создание липосомальных лекарственных средств.
Результаты исследования показали также, что созданная тест-система на основе клеток человека позволяет исследовать любые растворимые ксенобиотики.